ELISA试验测什么？解析其检测指标与核心应用。

酶联免疫吸附试验（ELISA）测什么

酶联免疫吸附试验（ELISA）是免疫学检测领域的关键技术之一，自1971年由Engvall和Perlmann首次提出以来，凭借高灵敏度、高特异性和操作简便性，广泛应用于临床诊断、食品安全、生物医药等众多领域，ELISA通过将抗原或抗体固定在固相载体（如微孔板）上，利用酶标记的抗体/抗原与待测物质结合后，通过底物显色反应实现检测，从而实现对特定物质的精准识别与定量分析。

ELISA的基本原理与核心类型

ELISA的核心原理是“固相化免疫反应+酶催化显色”，通过固相载体捕获待测物，结合酶标记抗体/抗原后，利用底物显色（如TMB显色为蓝色，终止后为黄色，用酶标仪检测吸光度）实现定量，其核心类型包括：

• 双抗体夹心法：适用于检测大分子抗原（如蛋白质、病毒抗原），原理：包被捕获抗体（针对抗原表位1），加入待测样本（含抗原），洗板后加入酶标记检测抗体（针对抗原表位2），洗板后加底物显色，吸光度与抗原浓度正相关。
• 间接法：适用于检测抗体（如感染后抗体），原理：包被抗原，加入待测样本（含抗体），洗板后加入酶标记二抗（针对人IgG），洗板后显色，吸光度与抗体浓度正相关。
• 竞争法：适用于检测小分子抗原（如激素、药物），原理：固定抗原于固相，加入待测样本与酶标记抗原竞争结合位点，样本中抗原越多，结合的酶标记抗原越少，显色越浅，通过标准曲线计算浓度。
• 捕获法：适用于检测IgM抗体（如感染早期抗体），原理：包被抗人IgM抗体，捕获待测样本中的IgM，再加入包被抗原，最后加入酶标记二抗，适用于早期感染诊断。

ELISA检测的主要对象

ELISA可检测抗原、抗体、激素、细胞因子等多类物质，具体如下：

• 抗原检测：

  • 病原体相关抗原：新冠病毒（N蛋白、S蛋白）、乙肝病毒（HBsAg）、甲型流感病毒（HA蛋白）等，用于传染病快速筛查。
  • 肿瘤标志物：甲胎蛋白（AFP，肝癌）、癌胚抗原（CEA，结直肠癌）、前列腺特异性抗原（PSA，前列腺癌）等，用于肿瘤早期诊断。
  • 食品安全相关抗原：兽药残留（如四环素、磺胺类）、农药残留（如有机磷农药）、过敏原（如牛奶蛋白、花生蛋白）等，确保食品质量安全。

• 抗体检测：

  • 感染相关抗体：新冠抗体（IgG/IgM）、乙肝表面抗体（HBsAb）、风疹病毒抗体等，用于感染后免疫状态评估。
  • 自身免疫病相关抗体：类风湿因子（RF，类风湿关节炎）、抗核抗体（ANA，系统性红斑狼疮）、抗甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb，甲状腺功能亢进）等，用于自身免疫病诊断。
  • 药物相关抗体：药物免疫原性检测（如胰岛素抗体、抗生素抗体），评估药物安全性。

• 其他：

  

  激素（如甲状腺刺激激素TSH）、细胞因子（如白细胞介素-6IL-6）、肿瘤坏死因子（TNF-α）等，用于内分泌疾病、炎症反应研究。

ELISA在不同领域的应用实例

ELISA的优势与局限性

• 优势：

  • 高灵敏度：可检测低浓度抗原（如pg/mL级别），适用于微量物质检测。
  • 高特异性：针对特定抗原表位，减少交叉反应，保证检测准确性。
  • 操作简便：标准化流程，适合实验室批量检测，减少人工误差。
  • 成本低廉：试剂和设备相对便宜，适合大规模应用。

• 局限性：

  • 交叉反应风险：部分抗原结构相似，可能导致假阳性。
  • 小分子检测效率低：对小于500Da的小分子抗原，检测灵敏度有限。
  • 操作污染风险：固相载体处理、洗板等步骤易引入污染，影响结果准确性。
  • 结果依赖标准曲线：需标准品制作标准曲线，操作中需严格遵循标准化流程。

常见ELISA检测对象及应用对比表

常见问题解答（FAQs）

1. ELISA能检测小分子物质吗？比如激素或药物残留。

   

   解答：ELISA能检测小分子物质，但需根据检测对象选择合适的方法，对于小分子抗原（如激素、药物残留），通常采用竞争法或间接法，激素（如甲状腺激素TSH）可通过间接法检测，药物残留（如兽药残留）可通过竞争法检测，对于小于500Da的小分子，ELISA的灵敏度可能不如其他技术（如HPLC），但通过优化固相载体和酶标记物，仍可实现有效检测。

2. ELISA检测结果受哪些因素影响？

   解答：ELISA检测结果受多种因素影响，主要包括：①样本处理：样本稀释不当、样本中存在干扰物质（如高脂、高糖）会影响检测准确性；②试剂质量：酶标抗体活性、底物稳定性等影响显色效果；③操作规范：洗板次数、孵育时间、温度控制等直接影响结果；④仪器性能：酶标仪的灵敏度、波长准确性会影响吸光度读取；⑤标准曲线制作：标准品质量、标准曲线拟合方式（如线性回归）影响结果计算,严格遵循操作流程和标准化管理是保证ELISA检测准确性的关键。